化工機械設備網
詳細介紹
總*(T-CHO)試劑盒說明書
For Research Use only
僅供研究用
貨號：QYS-239461
COD-PAP 法 96T
- 試劑組成及配制:
試劑組成 | 規 格 | 組 份 | 濃 度 | 保存條件 |
酶液 |
25ml×1 瓶 | Good’s 緩沖液 | 50mmol/L，pH6.7 |
2～8℃ 避光保存 |
* | 5mmol/L | |||
4-AAP | 0.3mmol/L | |||
*酯酶 | ≥50KU/L | |||
*氧化酶 | ≥25KU/L | |||
過氧化物酶 | ≥1.3KU/L | |||
校準品 | 0.1ml×1 瓶 | * | 見標簽 | |
附送 96 孔平底酶標板一塊 | 室溫放置 | |||
- 測定原理：
*酯 | CE | * | + | 脂肪酸 |
→→→ |
* | + | O2 | CO | Δ | 4 | 膽甾烯酮 | + | H2O2 |
→→→ |
|
H2O2 | + | 4-AAP | + | 3,5-DHBS | POD | 紅色醌化物 | + | H2O |
→→→ |
生成的醌類化合物顏色的深淺與*的含量成正比，分別測定校標準管和樣本管的吸光度值，計算*的含量。
- 操作過程:
- 樣本處理:
①、血清(漿)：直接測定，如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。
②、培養液樣本：吸取培養液，1000 轉/分，離心 10 分鐘，取上清測定。
[注]：一般建議細胞密度在 100 萬個/ml 以上。
③、組織樣本：準確稱取組織重量，按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例，加入 9 倍體積的勻漿介質，冰水浴條件下機械勻漿，2500 轉/分，離心 10 分鐘，取上清液待測。
[注]:1、如組織樣本不存在高脂樣本，勻漿介質統一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取。
2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本，勻漿介質統一用無水乙醇進行提取。
④、細胞樣本：
A、細胞收集:將制備好的細胞懸液取出，1000 轉/分，離心 10 分鐘，棄上清液，留細胞沉淀；用等滲緩沖液（* 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液）清洗 1～2 次，同樣 1000 轉/分，離心 10 分鐘，棄上清液，留細胞沉淀；
B、細胞破碎:加入 0.2～0.3ml 的勻漿介質（* 0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）進行勻漿，冰水浴條件下超聲破碎(功率 300W，3～5 秒/次，間隔 30 秒,重復 3～5 次) 或手動勻漿， 制備好的勻漿液不離心直接測定。也可采用裂解液裂解( *TritonX-100,1～2%,裂解 30～40 分鐘)，裂解好的液體不離心直接測定。
[注]：一般建議收集的細胞密度在 100 萬個/ml 以上。破碎好的液體可顯微鏡觀察細胞是否破碎*
- 操作表：
96 孔板操作,酶標儀比色 | |||
| 空白孔 | 校準孔 | 樣本孔 |
蒸餾水（μl） | 2.5 |
|
|
校準品（μl） |
| 2.5 |
|
樣本（μl） |
|
| 2.5 |
工作液（μl） | 250 | 250 | 250 |
混勻后 37℃孵育 10 分鐘，波長510nm 處，酶標儀測定各孔吸光度值。
全自動上機操作 | |||
樣本量/水 | Sample Volume | μl | 2.5 |
工作液 | reagent | μl | 250 |
37℃孵育 10 分鐘,工作液+蒸餾水調零,測定光吸收值 A。 | |||
主波長 | Main wavelength | nm | 510 |
反應類型 | Reaction type |
| 終點法 |
反應方向 | Reaction direction |
| 升反應(+) |
四、計算公式及舉例:
1.血清等液體樣本計算公式:
酶標儀比色: | *量 | = | 樣本OD值- 空白OD值 | X | 校準品濃度 |
(mmol/L) | 校準OD值- 空白OD值 | (mmol/L) |
*: | *量 | = | A樣 | X | 校準品濃度 |
(mmol/L) | A校 | (mmol/L) |
- 取正常人血漿2.5μl，按操作表操作，得空白孔吸光度0.0443，校準孔吸光度0.2344，樣本孔吸光度0.1724，則計算如下：
總*含量 | = | 樣本OD值- 空白OD值 | X | 校準品濃度 | = | 0.1724-0.0443 | X | 5.17 | = | 3.4838mmol/L |
(mmol/L) | 校準OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | 0.2344-0.0443 |
- 取大鼠血漿2.5μl，按操作表操作，得空白孔吸光度0.0443，校準孔吸光度0.2344，樣本孔吸光度0.1011，則計算如下：
總*含量 | = | 樣本OD值- 空白OD值 | X | 校準品濃度 | = | 0.1011-0.0443 | X | 5.17 | = | 1.5447mmol/L |
(mmol/L) | 校準OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | 0.2344-0.0443 |
2.組織、細胞計算公式:
酶標儀比色: | *含量 | = | 樣本OD值- 空白OD值 | X | 校準品濃度 | ¸ | 待測樣本蛋白濃度 |
(mmol/gprot) | 校準OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | (gprot/L) |
*: | *含量 | = | A樣 | X | 校準品濃度 | ¸ | 待測樣本蛋白濃度 |
(mmol/gprot) | A校 | (mmol/L) | (gprot/L) |
a、取10%小鼠肝勻漿2.5μl，按操作表操作，得空白孔吸光度0.0452，校準孔吸光度0.2350，樣本孔吸光度0.1038，同時測得10%小鼠肝勻漿蛋白濃度為12.0121gprot/L，則計算如下：
總*含量 | = | 樣本OD值- 空白OD值 | X | 校準品濃度 | ¸ | 待測樣本蛋白濃度 | ||||||
(mmol/gprot) | 校準OD值- 空白OD值 | (mmol/L) | (gprot/L) | |||||||||
= | 0.1038-0.0452 | X | 5.17 | ¸ | 12.0121 | = | 0.1329mmol/gprot | |||||
0.2350-0.0452 | ||||||||||||
五、產品描述：
本試劑盒采用 COD-PAP 法配制，用于體外測定總*含量。適用于各型酶標儀、半自動或*
六、性能指標：
1、試劑空白管吸光度≤0.100（光徑0.5cm）。
2、線性：0～10.34mmol/L 范圍內，r2＞0.995。
3、精密度：CV≤3%，批間相對極差≤5%。
4、穩定性：原裝試劑盒在 2℃～8℃避光保存，有效期為 12 個月。開啟后 2℃～8℃避光保存，可穩定 3 個月。
七、注意事項：
1、本產品僅用于科研，不得用于臨床診斷，切勿服用。
2、樣品含量如超出檢測范圍上*，可用生理鹽水稀釋樣本后進行測定，測定結果乘以稀釋倍數。
3、試劑防止葡萄糖、*等試劑的污染。
4、試劑與樣本量可按照*的要求，按照 1：100 的比例增減
化工機械設備網