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穩定細胞株篩選的三種方法淺析
閱讀:34 發布時間:2021-6-15業內周知,混合穩定細胞株具有許多不同的穩定細胞株。因為穩定化的整合過程常常與失活的宿主內源基因的插入同時進行,穩定化的混合細胞株或比較多個單克隆穩定化的細胞株是實驗準確數據的基礎。由此,我們淺析常見的3種穩定細胞株篩選的發展情況。
其一、96孔單克隆稀釋法篩選穩定細胞株
96孔單克隆稀釋法可用于低整合率的轉染法,或用于穩定懸浮細胞系的單克隆細胞系和篩選實驗。該方法的優點在于理論上可得到非常均勻的單克隆抗體,且能穩定篩選細胞懸液,是目前篩選穩定且高產率細胞株的理想方法。其缺點是工作量較大,需要大量勞動力來不斷的分板、循環篩選穩定細胞株,已達到篩選高產率的穩定性單克隆細胞的目的。
其二、單克隆環法篩選穩定細胞株
單克隆環法主要用于整合率低的轉染法以及獲得單克隆細胞株。單克隆環法具有工作量小的優點,只要把轉染體細胞按一定的細胞密度放入新的培養皿,用合適的藥物篩選并在培養皿中進行擴增,適合少量勞動力作業,其劣勢可能難以獲得高產率的穩定細胞株。
其三、逆轉錄病毒的混合克隆技術篩選穩定細胞株
此法可用于制備穩定混合細胞株,其優點在于能在短時間內得到穩定的細胞株,且能在任何時候將細胞稀釋成新的培養皿,傾向于整合靠近轉錄始端的位點的基因,容易激活下游基因,但同時這些整合到轉錄活性基因的基因很容易導致整合部位基因的插入失效,影響到克隆的純度。高等細胞株中存在非整合細胞,這種混合細胞內的細胞穩定結合,不會失去生長的優勢。