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細胞復蘇，生物學的一種術語，是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養，細胞恢復生長的過程。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。

 

細胞凍存的原理

細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。

細胞復蘇的步驟

①將冷凍管從液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，細胞融化后要盡快(約1min)移出37℃水浴。37℃水浴時間延長會提高細胞死亡率，復蘇過程中一般細胞死亡率在20%～25%之間。

②迅速用酒精棉球擦拭冷凍管外部殺菌消毒，然后放置在冰浴上。

③小心開啟瓶蓋，把細胞轉入含有4mL培養基的培養瓶中，然后把培養瓶移至培養箱，26℃～28℃培養1h，讓細胞貼壁。

④細胞貼壁后，小心移棄培養基，主要是去掉DMSO(懸浮生長細胞要通過離心沉淀除去DMSO)、死細胞及其碎片，加5mL新鮮培養基，26℃～28℃培養。

⑤細胞培養24h后，更換新鮮培養基，繼續培養直到形成單層，便可以傳代。

⑥詳細記錄復蘇細胞的名稱、數量、復蘇時間、存放部位等。

細胞復蘇的注意事項

1、注意無菌操作。

2、應在1-2min內使凍存液*融化。如果復溫速度太慢，則會造成細胞損傷。另外，細胞復蘇后的操作-好在4℃冰浴中進行，以減少冷凍保護劑對細胞的毒性。

3、細胞復蘇過程中，升溫的速率要大，把從液氮或-70℃冰箱中取出的細胞在短的時間內放入水浴鍋。

4、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動，使其受熱均勻，并防止水浴時水進入細胞凍存管污染細胞。打開細胞凍存管之前要用酒精棉球將凍存管消毒并晾干。

5、液氮操作有一定的危險性，打開液氮罐取出細胞時，戴上防護眼鏡。

6、如果凍存管密封不嚴，液氮可被吸入。由于解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，將可能發生爆炸。復蘇過程中應蓋上恒溫水浴鍋的蓋。