国产91在线|亚洲/米奇精品一区二区三区在线观看/亚洲国产精品一区二区九九/五月婷婷基地

*分型檢測試劑盒

SET A,B,C,D,E

*分型檢測試劑盒1．概述

 *分型檢測試劑盒SET A，B,C,D,E,采用三明治（夾心）酶聯免疫反應法檢測固態和液態食品及細菌培養物中的*腸毒素（SET）A，B，C，D，E。

葡萄球菌屬于微球菌屬。*和豬葡萄球菌可制造一種或多種耐熱的腸毒素。這些腸毒素可引致食物中毒。

除沙門氏菌外，*是產生腸毒素并導致食物中毒的主要元兇之一。一般來說，每克食品中5 x 105個產毒素的*可導致中毒。然而，一些研究也顯示，僅100 - 200 ng的葡萄球菌腸毒素量便可引致中毒癥狀。*腸毒素常存于意大利面、肉制成品、奶、奶產品、冰淇淋、蛋類產品、沙拉、面包、蛋糕、餡餅及由這些產品制備而成的其他食品中。其中血清型為A，B，C，D和E 的腸毒素尤為嚴重。該試劑盒特點包括：

• 簡單的前處理方法（離心）。
• 低檢測限（0.25ng/ml）。
• 快速的ELISA檢測方法（在不考慮樣品數量下只需不到3小時）。

 

*分型檢測試劑盒2．試劑盒原理

 *分型檢測試劑盒，檢測的基礎是抗原抗體反應。微孔板A - E孔和H孔包被有針對葡萄球菌腸毒素A，B，C，D和E的特異性抗體。F和G孔包被有針對無免疫動物的抗體（質控）。加入樣品溶液至孔A至G（和微孔板架上的標記一致），加入陽性質控至孔H。見附錄1。樣品溶液中可能含有的毒素會對應的捕獲抗體結合。沒有結合的部分會在洗滌步驟中被除去。通過加入針對葡萄球菌腸毒素的*酶標記的抗SET抗體酶連接物可以與板上固定結合的腸毒素連接。未連接的酶連接物在洗滌過程中被除去。加入鏈霉親和素POD，孵育后洗板。然后加入底物/發色劑。結合在一起的鏈霉親和素POD酶連接物將無色發色劑轉化為藍色的產物。加入反應終止液后使顏色由藍色轉變為黃色。在450/630 ± 10 nm 處測量。吸光度值與樣品中的葡萄球菌腸毒素濃度成正比。

 

1. 試劑盒組成

內容物	規格	保存
金葡抗體包被板(Anti- Coated Plate)	96孔板（12×8 孔）	2-8℃
陽性質控（Positive Control）	2.0mL	2-8℃
酶連接物I(HRP-conjuge I)	12mL	2-8℃
酶連接物II（HRP-conjuge II）	12mL	2-8℃
10×濃縮洗液(Wash Solution)	25mL	2-8℃
終止液(Stop Buffer)	14mL	2-8℃
TMB底物(Tmb Substrate)	14mL	2-8℃

 本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。

*分型檢測試劑盒

4.檢測限

檢測物質	檢測下限（ng/ml）
液態樣品	0.25
固態樣品	0.625
細菌培養液	0.25

 

5．其他需要而本試劑盒未提的設備或材料

• 酶標儀(450nm)
• 恒溫培養箱
• 勻質器
• 漩渦振蕩器
• 微量加樣器(10、20、100和1000mL各一支)
• 多道槍：50-300mL

 

6.注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得實驗效果。

• 陽性質控含有葡萄球菌腸毒素，對健康有危害，因此應避免皮膚接觸和滴入口中。
• 所有與陽性質控接觸過的材料必須小心處理，被污染的玻璃器皿需要用次氯酸鈉（10 %（v/v））浸泡過夜（pH值要用HCl溶液調整至7）。
• 陽性質控還包含疊氮鈉，也需特別注意。
• 反應終止液含1 N硫酸
• 保存試劑盒于 2 - 8 °C，不要冷凍。
• 將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封儲存于2 - 8 °C條件下。
• 無色發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
• 對過了有效期（見試劑盒外標簽有效期）的試劑盒不再提供任何質量保證。
• 若對試劑盒中的反應液進行了稀釋，或實驗室器材未*清潔，則可能影響本檢測的靈敏度。
• 不能交叉使用不同批號的盒中試劑。

 

7．樣品的準備

樣品保存在2-4℃不超過1-2天，如果需要保存較長的時間，應該放置-20℃。樣品使用前應恢復到室溫。

1）牛奶

• 奶類樣品（10 - 25 ml），特別是原奶樣品，在低溫條件下離心：10 min / 3500 g / 10 °C（若沒有條件進行低溫離心，則在離心前將樣品冷藏降溫）。
• *去除（吸取）上層脂肪層 。
• 每孔取100 µl進行檢測 。

2）面條和大米（煮好的），肉類、冰激淋、快餐和其他脂肪含量小于40 %的食品樣品

•  取10 - 25 g樣品粉碎，按照每克樣品1.5 ml PBS緩沖液（PH值7.4）的比例進行混合（例如10 g 樣品 + 15 ml 緩沖液）
• 振蕩15分鐘
• 離心：10 min / 3500 g / 10 °C
• 據情況除去上層脂肪
• 每孔取100 µl進行檢測

 

3）脂肪含量大于40 %的食品樣品

• 取10 - 25 g樣品粉碎，按照每克樣品1.5 ml PBS緩沖液（PH值7.4）的比例進行混合（例如10 g 樣品 + 15 ml 緩沖液）
• 振蕩15分鐘
• 離心：10 min / 3500 g / 10 °C
• 取其5 ml上清液于另一離心管中，加入5 ml正庚烷，充分混合5分鐘
• 離心：5 min / 3500 g / 10 °C
• *去除上層庚烷層，不能含有任何庚烷殘留，將足夠用的下層水相轉移到另一新的干凈試管中
• 每孔取100 µl進行檢測

   

8．酶聯免疫反應測試步驟

試劑準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

1x洗液的制備

1體積的10x洗液同9體積的蒸餾水混合

*分型檢測試劑盒檢測：

• 將所需數量的微孔板條插到微孔板架上。一個樣品需要一整條微孔板條。
• 按微孔板架上的標記向A到G孔里添加100 µl處理好的樣品，向H孔里添加100 µl陽性質控。輕輕混勻，覆蓋微孔板后，在35 - 37 °C條件下孵育1小時。
• 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證*除去孔中的液體。使用多級移液器向每孔加入300 µl洗滌緩沖液洗滌微孔。上述操作再重復進行四遍。
• 向每一個微孔中加入100 µl酶連接物I溶液，充分混合，覆蓋微孔板后，在35 - 37 °C條件下繼續孵育1小時。
• 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證*除去孔中的液體。使用多級移液器向每孔加入300 µl洗滌緩沖液洗滌微孔。上述操作再重復進行四遍。
• 向每一個微孔中加入100 µl酶連接物II溶液，充分混合，覆蓋微孔板后，在35 - 37 °C條件下繼續孵育30分鐘。
• 倒出孔中的液體，將微孔板架倒置在吸水紙上拍打（每輪拍打3 次）以保證*除去孔中的液體。使用多級移液器向每孔加入300 µl洗滌緩沖液洗滌微孔。上述操作再重復進行四遍。
• 向每一個微孔中加入100 µl 底物，充分混合，覆蓋微孔板后，在35 - 37 °C條件下繼續孵育15分鐘。
• 向每一個微孔中加入100 µl 反應終止液，充分混合。在加入反應終止液后30 分鐘內于450/630 ± 10 nm 處測量吸光度值。

 

9. 結果計算

1. 臨界值的計算

   計算每個樣品F和G孔中的陰性質控的吸光度值平均值。臨界值通過平均值加上0.15得到。  

            舉例：    陰性質控1（微孔F） = 0.008

                      陰性質控2（微孔G）= 0.010

 

                  平均值 = 0.009  

                   臨界值 = 0.009 + 0.15 = 0.159

 2. 檢測質控

         陽性質控的吸光度值應大于或等于1.0。

         陰性質控吸光度值的平均值應小于或等于0.2。

         只有在滿足第1和第2點的前提條件下，才應進行結果評估。

 3. 結果分析

      1. 如果樣品在450/630 ± 10 nm處的吸光度值小于臨界值，為陰性結果。

      2. 如果樣品在450/630 ± 10 nm處的吸光度值大于或等于臨界值，為陽性結果。

 

 

附錄I